shRNA表达克
所有shRNA靶点序列的选取均经过准确算法计算。根据基因的不同,shRNA其茎的长度在19到29碱基对之间。这些保证shRNA表达后有很高的表达抑制效率和zui低的脱靶效应(offtargeteffect)。
shRNA所采用的载体有慢病毒载体和以哺乳动物细胞为宿主的载体,各类载体拥有不同的启动子和跟踪标记基因可供选择。
载体中所带有的绿色荧光跟踪标记基因(eGFP)可以用于监测质粒载体的转染效率和转导病毒的感染效率。
载体结构上带有稳定细胞株的筛选标记(嘌呤霉素)和绿色荧光跟踪标记基因(EGFP),这些特性使得该载体既能用于稳定抑制效应的研究,也可用于瞬时抑制效应的研究。
使用慢病毒载体系统,可转导shRNA进入常规的分裂细胞,以及不分裂而难以转染的目的细胞株。
载体的各部分序列已经过测序,包括启动子、编码shRNA的正义和反义链、发夹结构、终止子和其他接头序列。
Omicslink™的应用
基因表达下调shRNA对单个基因的基因表达抑制效应可以通过和一个包含不规则序列的阴性对照来比较研究。
信号通路研究我公司的人类基因ORF按照不同的信号传导、代谢、疾病通路和相关性、基因家族等进行了分类。将已知同一通路的shRNA以96孔或384孔板的形式排列在一起,可一次研究一组基因在某一信号通路中的功能。目前我公司已可提供针对人类全部激酶基因的shRNA,并已按照按不同激酶的功能进行了分类。
ORF表达确证我公司已有shRNA相应人类靶基因的ORF,可装在各种表达载体中,带有不同的标签和跟踪标记基因。这些正常的ORF表达和在shRNA靶序列带有沉默突变的同样的ORF表达,可以用于shRNA确认研究和基因功能拯救研究。
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